Analiza krvi na tms što je to

Dijeta

Tandemska masena spektrometrija (TMS) jedna je od suvremenih metoda analize spojeva, koja se široko koristi za različite znanstvene i praktične svrhe. Ova metoda omogućuje analizu nekoliko stotina spojeva u mikročestvima biološkog materijala.

Gdje se primjenjuje ova metoda?

U svijetu prakse zdravstvene zaštite ova metoda se koristi za masovno probira novorođenčadi za nasljedne metaboličke bolesti (NBD). Na mjestu suhe krvi, moguće je utvrditi aminokiseline (uključujući fenilalanin) i acilkarnitine. Kvantitativno određivanje tih tvari omogućuje uključuju nekoliko desetaka nasljednih bolesti koje se odnose na različite klase NBO (poremećaja metabolizma amino kiseline, defekata organskih kiselina i masnih kiselina mitohondrijske P-oksidacije). Prema stranim književnim podacima, njihova ukupna učestalost iznosi 1: 2000 živa novorođenčad. Prethodno, za dijagnosticiranje tih bolesti zahtijevaju velike količine biološki materijal, nekoliko studija (analiza amino kiselina, plin za određivanje kromatografija-spektroskopija od acilkarnitini spektra), što zahtijeva mnogo vremena i materijalne troškove. TMS vam omogućuje kvantificiranje svih tih spojeva tijekom jedne analize!

Koje se bolesti može otkriti pomoću ove metode?

Nažalost, jedan univerzalni visoko osjetljiv i specifičan test za dijagnozu svih poznatih NBO ne postoji, ali tehnologije usmjerene na identificiranje nekoliko desetaka ili čak stotina bolesti u jednoj analizi već postaju stvarnost. TMS se primjenjuje na takve metode. Ova metoda omogućuje prepoznavanje s visokom pouzdanosti oko 40 nasljednih metaboličkih poremećaja aminokiselina, organskih kiselina i defekata mitohondrijske beta oksidacije masnih kiselina. Većina tih bolesti javlja se tijekom razdoblja novorođenčadi. Popis bolesti koje se mogu dijagnosticirati pomoću ove tehnologije nalazi se u odjeljku analize http://labnbo.ru/prajs-list

Zašto je potrebno što je prije moguće dijagnosticirati metaboličke bolesti?

Mnogi liječnici pogrešno vjeruju da su NBO tako rijetke da ih je potrebno isključiti samo na posljednjem mjestu, a vrlo često ispravna dijagnoza već postoji kasnije ili se bolest uopće ne dijagnosticira.

Međutim, već je poznato više od 150 oblika NBO za koje su razvijene metode učinkovite terapije i koliko je život i zdravlje pacijenta ovisi o brzini i ispravnosti određene dijagnoze. Za 20 bolesti koje se mogu dijagnosticirati s TMS-om, razvijen je poseban tretman. Isporuka u dijagnozi vremena - spašeni život i zdravlje pacijenta!

Pravila za prikupljanje uzoraka krvi

Krv se skuplja na standardnoj kartici za filtriranje (br. 903), koja se koristi za prikaz novorođenčadi na PKU. Krv može biti kapilara (od prsta, pete) i venske. Potrebno je natopiti dobro odabrano područje na filteru! Na kartici za filtriranje mora biti jasno naznačeno ime, tko i od koga je pacijent poslan, datum rođenja i telefonski broj liječnika koji je pohađao. Uzorak se suši 2-3 sata u zraku. Preporučljivo je priložiti ekstrakt iz medicinske povijesti.

Primjer ispravne zbirke uzoraka krvi:

Primjeri nepravilnog skupljanja uzoraka krvi:

Puno malih čestica

Uzorak nije bio sušen do kraja, što je rezultiralo zamućivanjem uzorka tijekom transporta.

Filtarski papir bio je slabo impregniran krvlju.

Korisni linkovi:

(NCBI) je informativni nacionalni resurs za molekularnu biologiju, osnovan 1988. godine. PubMed baza podataka sadrži više od 15 milijuna članaka iz različitih biomedicinskih časopisa (na engleskom jeziku).

Katalog ljudskih gena i genetskih bolesti, koje je izradio dr V.A. McKusick i njegovi kolege (na engleskom).

(SSIEM) - Društvo za proučavanje nasljednih metaboličkih bolesti (kongenitalne metaboličke pogreške).

Znanstvena institucija Federalnog državnog proračuna "Centar za medicinsko genetičko znanje"

Informativni portal o rijetkim bolestima, mogućnosti njihovog liječenja i dijagnostike za pacijente s rijetkim bolestima

All-Russian Society of Rare Diseases osnovana je 2012. godine na inicijativu pacijenata, članova njihovih obitelji i stručnjaka. Do danas, VOZ ujedinjuje više od 400 pacijenata iz 47 regija Ruske Federacije s 63 rijetke bolesti.

Analiza krvi na tms što je to

Tijekom godina pregledavanje je općenito izvedeno testovi, specifična za svaku pojedinu bolest. Na primjer, screening PKU temelji se na mikrobiološkoj ili kemijskoj procjeni povećanja fenilalanina.

Ta je situacija u posljednje vrijeme potpuno promijenjena dekada s pojavom tehnologije tandemske masene spektrometrije (TMS). Analiza masenom spektrometrijom (TMS) ne samo da može točno i brzo otkriti povišen fenilalanin krvi mjesto u novorođenčeta s manje lažno pozitivnih odgovora u usporedbi sa starijim metodama, ali također omogućava otkrivanje istodobno nekoliko desetaka drugih biokemijskih poremećaja.

Neki od njih već su prikazani pojedinačni testovi. Na primjer, mnoge države imaju koristi specifične testove za otkrivanje povećanog metionin, otkriti dvojne spektrometrije masa (TMS) je također pouzdana metoda za određene bolesti relevantnim kriterijima screening skrining-onatalnogo, ali nije imao pouzdanu provjeru prije.

Na primjer, Nedostatak MCAD - bolest oksidacije masnih kiselina, obično asimptomatska, ali klinički detektirana, kada pacijent povećava katabolizam. Otkrivanje nedostatka MCAD pri rođenju mogao dokazati vitalni kao bolesna djeca imaju vrlo visok rizik od po život opasne hipoglikemije u ranom djetinjstvu sa kataboličkih stanja uzrokovanih između kurrentnymi bolesti, kao što su virusne infekcije.

Gotovo četvrtina djece s nedijagnosticiran nedostatak MCAD umiru u prvoj epizodi hipoglikemije. Uz pravilno liječenje, metabolički poremećaj može biti usidren. S nedostatkom MCAD, primarni cilj pregleda je upozoriti roditelje i liječnike o riziku od metaboličke dekompenzacije, jer su djeca između napada praktički zdrava i ne trebaju dnevno liječenje osim dugotrajnog posta.

Ipak, korištenje tandem masena spektrometrija (TMS) za novorođenačkog probira upitna. Pored pružanja brzog ispitivanja mnogih poremećaja, neonatalna screening za koje se već radi ili bi mogao biti opravdan, masenom spektrometrijom (TMS) također identificira djecu s urođenih pogrešaka u metabolizmu kao što metilmalonske acidemia, obično nisu uključeni u program probira zbog njihove rijetkosti i teškoća u pružanju konačni terapija, zaštićen od progresivne neuroloških oštećenja.

Otkrivene bolesti s tandem masenom spektrometrijom

I. Aminoatsidemii:
- PKU
- Bolest urina s mirisom javorovog sirupa
- homocistinuriju
- Tsitrullinemiya
- Arginin-sukcinska kiselina
- Tip I tirosinemija

II. Organska kiselina:
- Propionska kiselinaemija
- Metilmalonska acidemija
- Isovalerična kiselina
- Izolirana 3-metil-krotonil glicinemija
- Glutarna kiselina (tip I)
- Nedostatak mitohondrijske acetoacetil-coA-tiolaze
- Hidroksimetilglutarna kiselina
- Nedostatnost više CoA karboksilata

III. Poremećaji u oksidaciji masnih kiselina:
- Nedovoljan SCAD
- Nedostatak hidroksi-SCAD
- Nedovoljan MCAD
- Nedovoljno VLCAD
- Nedostatak LCAD i nedostatak trifunkcionalnih proteina
- Glutatsku kiselinu tipa II
- Nedostatak karnitin-palmitiltransferaze II

Tandemska masena spektrometrija (TMS) također može identificirati abnormalne metabolite s neizvjesnom zdravstvenom vrijednosti. Na primjer, SCAD nedostatak je druga bolest oksidacije masnih kiselina, najčešće asimptomatska, iako neki bolesnici mogu imati poteškoće povezane s epizodnom hipoglikemijom. Prema tome, prediktivna vrijednost pozitivnog rezultata analize tandem masene spektrometrije (TMS) za simptomatsku SCAD vjerojatno je vrlo niska.

Je li prednost otkrivanja prevagnula Nedostatak SCAD-a negativni učinak testa, uzrokujući neopravdanu anksioznost roditelja, za većinu novorođenčadi s pozitivnim rezultatom ispitivanja, koji nikada nisu pokazali kliničke simptome? Dakle, svaka bolest otkrivena metodom tandem masene spektrometrije (TMS) ne zadovoljava kriterije za neonatalni screening.

Zato su neki stručnjaci zdravstvena zaštita sustava pokazuju da roditelji i liječnici trebaju biti prijavljen samo o odstupanjima u metabolita s dokazanom kliničkom korist. Drugi zagovaraju korištenje svih informacija koje masenom spektrometrijom (TMS), kao i ponudu obavijestiti liječnike i roditelje sve abnormalne metaboliti, bez obzira koliko je dobar kriteriji bolesti odgovaraju standardnim neonatalnog probira. U budućnosti možete pažljivo pratiti pacijente s anomalijama nepoznatog značaja. Zbog svih tih razloga, korištenje masenom spektrometrijom (TMS) za probir novorođenčadi i dalje je predmet rasprave.

za prikazivanje populacije u antenatalnom razdoblju obično se koriste dva testa: kromosomska analiza kod starijih žena i AFP majčinog seruma ili trostruko testiranje za DNT i kromosomsku aneuploidiju.

Ako je trudnoća ugrožena zbog -in - invazivne procedure za prenatalnu dijagnostiku kromosomskih aneuploidija zbog životne dobi, također treba ponuditi dodatnu provjeru, primjerice određivanje razine AFP u amnionske tekućine, genoma širom potraga za komparativnu hibridizacije opasnih submicroscopic brisanja mutacije screening za cističnu fibrozu i ostale zajedničke oboljenje.

Analiza krvi na tms što je to

Tandemska masena spektrometrija jedna je od suvremenih metoda analize spojeva, koja se široko koristi za različite znanstvene i praktične svrhe. Ova metoda omogućuje analizu nekoliko stotina spojeva u mikročestvima biološkog materijala. U svjetskoj zdravstvenoj praksi ova se metoda koristi za masovno probira novorođenčadi za nasljedne metaboličke bolesti (NBD). Na mjestu suhe krvi, moguće je utvrditi aminokiseline (uključujući fenilalanin) i acilkarnitine. Kvantitativno određivanje tih tvari omogućuje uključuju nekoliko desetaka nasljednih bolesti koje se odnose na različite klase NBO (poremećaja metabolizma amino kiseline, defekata organskih kiselina i masnih kiselina mitohondrijske beta-oksidacije). Prethodno, za dijagnosticiranje tih bolesti zahtijevaju velike količine biološki materijal, nekoliko studija (analiza amino kiselina, plin za određivanje kromatografija-spektroskopija od acilkarnitini spektra), što zahtijeva mnogo vremena i materijalne troškove. TMS vam omogućuje kvantificiranje svih tih spojeva tijekom jedne analize! Hereditarna poremećaji metabolizma amino kiseline, oštećenja organskih kiselina i mitohondrijske masnih kiselina beta-oksidacije broja oko 100 nosological entiteta, od kojih je većina očituje u neonatalnog perioda. Njihova frekvencija je više od 1: 5000 živo novorođenčadi. Mnogi liječnici pogrešno vjeruju da je ova skupina bolesti su toliko rijetki da ih treba isključiti kao posljednji izbor, a vrlo često ispravna dijagnoza je već u kasnijim fazama bolesti ili ne dijagnosticira na sve.

Tijekom analize 52 pokazatelja (aminokiseline i acilkarninija)

Ispitni materijal: kapilarni krv u suhom obliku

Priprema za studiju: br

Dan prijema: tijekom radnog vremena medicinskog centra

Br. NO., Screening novorođenčadi. "PETO" (analiza spektra aminokiselina i acilkarnitina)

  • Slični slučajevi bolesti u obitelji.
  • Slučajevi iznenadne smrti djeteta u ranoj dobi u obitelji.
  • Oštro pogoršanje djetetova stanja nakon kratkog razdoblja normalnog razvoja (asimptomatski interval može trajati od nekoliko sati do nekoliko tjedana).
  • Neobičan miris tijela i / ili urin ("slatki", "miš", "kuhani kupus", "znojni noge" itd.).
  • Neurološki poremećaji - mentalni poremećaji (letargija, koma), razni tipovi konvulzivnih napada, promjene u tonusu mišića (hipotenzija mišića ili spastična tetrapareza).
  • Kršenje ritma disanja (bradypnoe, tachypnea, apnea).
  • Poremećaji drugih organa i sustava (oštećenja jetre, hepatosplenomegalija, kardiomiopatija, retinopatija).
  • Promjene laboratorijskih parametara krvi i urina - neutropenija, anemija, metaboličke acidoze / alkalosis, hipoglikemije / hiperglikemije, povećana aktivnost jetrenih enzima i vrijednosti kreatin kinaze, ketonurija.
  • Dodatna dijagnoza 37 nasljednih metaboličkih bolesti zajedno sa obveznim državnim programom za otkrivanje 5 nasljednih bolesti: screening novorođenčadi: "PYATOCHKA".

Tumačenje rezultata istraživanja sadrži informacije liječniku koji posjećuju pa nije dijagnoza. Informacije iz ovog odjeljka ne mogu se koristiti za samodijagnostiku i samooblikovanje. Točna dijagnoza daje liječnik, koristeći rezultate istraživanja i potrebne informacije iz drugih izvora: anamneza, rezultati drugih istraživanja, itd.

Jedinice u laboratoriju INVITRO: μmol / litra.

LABORATORIJI ZDRAVSTVENIH BOLESTI IZMJENE TVARI

Indikacije za TMS analizu

Klinička dijagnoza kongenitalnih metaboličkih poremećaja aminokiselina, organskih kiselina i defekata b-oksidacije mitohondrija može predstavljati određene poteškoće, budući da ove bolesti ne posjeduju specifične specifične znakove i simptome. Zato je studija svih pacijenata u odjelima za patologiju novorođenčadi, jedinice za intenzivnu njegu djece mogu pomoći u brzom otkrivanju tih nasljednih bolesti.

Indikacije za proučavanje acilkarnitina i aminokiselina TMS-om su:


7. Promjena krvi i urina - trombocitopenija, neutropenija, anemija, metabolička acidoza, hipoglikemije / alkalosis / hiperglikemije, povišene razine enzima jetre i kreatin kinaze, ketonurija.

Genetski testovi

Djevojke, neurolog koji smo poslali genetici (rekla je da cerebralna paraliza nije naša dijagnoza, iako je ona odvela u sanatorij za liječenje). Recite mi, tko se suočava s tim, koliko je približno? Još ne znam što će nam biti poslano, ali želim znati što se pripremiti, nije opći test krvi...

Mobilna aplikacijaSretna mama 4.7 Komunikacija u aplikaciji je mnogo praktičnija!

Ne mogu reći. sve može biti. i sve se razlikuje na različite načine

Odustali smo puno od svega! Kariotip od 4000 rubalja., TMS 4000 rubalja amminokisloty urina 4 puta (10.000 rubalja za sve), amminokisloty krv četiri puta, također, oko 10.000 rubalja, 12000 rubalj Dravet sindrom, laktat mnogo puta, ne jeftini konzultacija genetika i sitnica „poli- Male stvari. "Gensko ispitivanje nije jeftino!

Multi-steroidni test krvi: određivanje vitalnih ljudskih hormona na kvalitativno novoj razini

Pojam "multi-steroidna analiza" odnosi se na određivanje profila steroidnih hormona metodom kromatografije-masene spektrometrije. Ukupnost rezultata ove analize označena je izrazom "steroidni profil". U biti, to su dva ekvivalentna pojma koja označavaju istu stvar.

Multisteroidny analiza - domaće razvoj, tehnika analize provjerena i potvrđena kao „postupak (postupak) mjerenje masene koncentracije steroidnih hormona u uzorcima krvi tekućinske kromatografije -. Masenom spektrometrijom MUS 08-47 / 376”, registrirane u registrirati Rosstandart pod brojem FR.1.31.2015.21875.

Trenutno, multiseroidna analiza nije uključena u popis testova koje je odobrilo Ministarstvo zdravstva Ruske Federacije i provodi se kao dio znanstvenog istraživanja. Sami pacijenti su prisiljeni platiti trošak ove analize. U tijeku je rad kako bi se osiguralo da u budućnosti ti troškovi budu pokriveni osiguranjem.

Kvantitativno određivanje glavni steroidni hormoni i seruma metabolita ili slinovnice tekućine referentnom metodom - plinska kromatografija-tandem masene spektrometrije (u literaturi ovaj postupak se također navodi kao LC-MS / MS) - mukotrpan i skup postupak. Ključna karakteristika metode je mogućnost da se definiraju sve objavljene analita u jednom testu (Sl. 1), no na temelju određivanja analita vrijednosti dobivene malo vjerojatno ne manje od alternativnih imunokemijskih metodama.

Slika 1. Analize određene tijekom jedne analize, prema postupku

Zašto je naziv tehnike koji opisuje biomatorsku "krv"?

Da bi ga se odmah razlikovalo od poznate analize "steroidnog profila urina". Treba napomenuti da je sadržaj informacije za analizu urina je sasvim drugačija i zahtijeva drugačiji tretman, kao što je sadržano u urinu uglavnom neaktivne oblike steroidi: sulfati, glukuronida i hidroksilirani derivati ​​imaju neželjene organizam, a od toga reproduciraju. U krvi određuju se koncentracije aktivnih oblika steroidnih hormona koji cirkuliraju u sustavu opće opskrbe krvlju, ulaze u stanice i imaju signalni učinak na genom.

Koji medicinski uvjeti predstavljaju definiciju steroidnog profila krvi, na koji će liječnici steroidni profil krvi pomoći u dijagnozi?

1. Sve vrste kongenitalne disfunkcije adrenalnog korteksa (VDKN). VDKN je kongenitalna bolest koja se očituje u kršenju biosinteze steroida. To je uzrokovano kršenjem funkcioniranja jednog od 5 enzima adrenalnog korteksa. To može biti deficit 21a-hidroksilaza (CYP21) i 11b-hidroksilaza (CYP11B1). Tradicionalni novorođenče metode probira VDKN imuno često daju lažno pozitivne rezultate u određivanju 17-hidroksiprogesterona. Stoga je u svim spornim slučajevima potrebno potvrđivanje dijagnoze pomoću LC-MS / MS [1]. Dijagnoza ne-klasičnih oblika VDKN (NF VDKN) imunokemijskih metoda predstavlja znatnu poteškoću, pa NF VDKN često ne dijagnosticira neonatalnog probira, ali se opaža poslije: u adolescenata pojavljuje rast prerano kose, akne; djevojčice - hirsutizam, menstruacijska disfunkcija, reproduktivni poremećaji. Za steroidni profilu kada NF VDKN karakterizirana povećanim 21-deoxycortisol i 17-OH-progesterona, međutim multisteroidny analize u kombinaciji sa genetičkom testiranju je vrlo korisno za dijagnosticiranje bolesti.

2. Nedostatak nadbubrežne žlijezde. Za to se provodi stimulacijski test s ACTH, a mjere se kortizol, aldosteron i 11-deoksikortisol: bazalna, 30 i 60 minuta nakon stimulacije. Uz primarnu adrenalnu insuficijenciju, aldosteron ne reagira na stimulaciju, dok je u sekundarnoj insuficijenciji zabilježen porast razine. U kontrolnoj skupini, razina 11-deoksikortisola je povećana 15-20 puta kao odgovor na stimulaciju ACTH, a kortizol - približno 3 puta [2].

3. Hipogonadizam kod muškaraca. Za ispravnu dijagnozu hipogonadizma kod muškaraca potrebno je utvrditi točnu razinu ukupnog testosterona (TT) pomoću masene spektrometrije. U studiji od 10.000 volontera utvrđeno je da se može napraviti dijagnoza hipogonadizma ako je koncentracija CT ispod 12,1 nmol / L prema podacima masene spektrometrije [3].

4. Kontrola liječenja supstitucijom muškaraca i žena (HRT). Za ove pacijente masena spektrometrija je „zlatnog standarda”, jer omogućuje izabrati ispravan terapijsku dozu hormona (ili stimulator) trag u detaljima reakcije svih metabolita u zamjensku terapiju, a da se izbjegne interferencija inherentne imunokemijskom metodama [4-6].

5. Vrlo je važno pratiti razine steroidnih hormona tijekom trudnoće i unutar jedne godine nakon porođaja. Multi-steroidi pružaju puno preciznije informacije o statusu androgena u usporedbi s tradicionalnim DHEA-sulfatom.

6. Ginekologija. "Virilizirajući" (androgeni proizvodi) adrenalni tumori imaju aktivnost koja proizvodi androgen i uzrokuju razvoj virilnog sindroma kod žena. Nađeno je da se gotovo bilo hormonski aktivnog tumor jajnika može biti izvor prekomjerne proizvodnje androgena i / ili estrogena i treba se dijagnosticira pomoću metoda masenom spektrometrijom [7].

7. Dijabetes. Ova bolest utječe na živčani sustav i utječe na koncentraciju neurosteroida. LC-MS / MS omogućuje određivanje koncentracija neuroaktivnih steroida kako bi se razvili novi pristupi u liječenju dijabetičke nefropatije [8].

8. Sportska medicina. Steroidni profil sportaša u krvi i slini može pružiti važne informacije o svom zdravstvenom stanju, atletskom obliku, kontrolirati tečaj treninga zbog optimalne raspodjele opterećenja.

Multi-steroidna analiza teško živi sama po sebi, imajući u vidu širok raspon metoda imunoanalize i otpornost od pristaša tradicionalnih tehnologija. Ali iza ove metode je budućnost, već je prepoznata kao najbolji predstavnici medicinske znanosti [9].

Što je ALS

Amiotrofične lateralne skleroze - najčešći oblik bolesti motoričkih neurona, što je neurodegenerativna bolest koja utječe na motorne neurone u mozgu i leđnoj moždini

Dijagnoza ALS-a

Simptomi ALS mogu se razlikovati za različite ljude, budući da bolest ima pojedinačni karakter i brzinu progresije.

Amiotrofična lateralna skleroza iznimno je teško dijagnosticirati iz nekoliko razloga:

  • ovo je rijetka bolest;
  • rani simptomi su prilično jednostavni, na primjer, nespretnost, neugodnost u rukama ili malo tvrdoglav govor, dok sve gore navedeno može biti rezultat potpuno različitih razloga;
  • bolest utječe na svaku osobu drugačije, nema definitivan simptom, što jasno određuje ALS.

Ako terapeut sumnja da pacijent ima ALS, treba ga uputiti neurologa. Tada osoba može imati niz dijagnostičkih pregleda, koji se mogu izvoditi i izvan pacijenta i pacijenta.

Ispitivanje krvi

Studije će pokazati je li razina kreatin kinaze povišena u krvi. Ovaj enzim nastaje kada je uništeno mišićno tkivo, a njezina se razina može povećati kod osoba koje pate od ALS-a. Ali taj pokazatelj nije poseban znak ALS-a, jer može biti pokazatelj drugih bolesti.

Elektroneuromiografija (ENMG)

S ENMG-om, tanke igle se koriste za snimanje živčanih impulsa u pojedinim mišićima. Snimanje se obično vrši iz svih dijelova mišića i grudi (ždrijela). Mišići koji su izgubili inervaciju nalaze se jer se njihova električna aktivnost razlikuje od aktivnosti zdravih mišića. Rezultati ENMG-a mogu se razlikovati od normalne, čak i ako specifični mišić još uvijek ne utječe na bolest.

Uz ENMG provjerava se i brzina impulsa duž živčanih vlakana. Za to se električni impuls prolazi kroz malu brtvu u dodiru s kožom. Ovo je vrlo važna dijagnostička metoda za istraživanje.

Transcranijalna magnetska stimulacija (TMS)

Ovo je nova metoda koja se može izvesti istodobno s ENMG-om. Namijenjen je procjeni stanja motoričkih neurona u mozgu. Rezultati TMS-a mogu pomoći u dijagnosticiranju.

Snimanje magnetske rezonancije (MRI)

MRT može otkriti oštećenje živčanog sustava uzrokovano moždanim udarom, Alzheimerovom bolesti, Parkinsonovom bolesti, multiple sklerozom, tumorima i ozljedama kralježnične moždine. MRT ne otkriva nikakve posebne promjene u ALS-u, jer se šteta uzrokovana tom bolesti ne odražava na slikama. Ova metoda istraživanja koristi se za isključivanje bolesti sličnih simptoma kao što su ALS.

Ostale metode

Neurolozi se mogu odlučiti za obavljanje dodatnih pregleda kao što je lumbalna punkcija ili biopsija mišića, ako nešto ukazuje na njihovu potrebu. Ali ti se pregledi uvijek ne koriste u dijagnozi ALS-a.

Primjena tandem
masena spektrometrija (HPLC-MSMS)
u kliničkoj dijagnozi

Masena spektrometrija je perspektiva razvoja kliničke kemije, budućnosti u kojoj će revolucija u kliničkoj dijagnozi dovesti do rasprostranjenog korištenja masene spektrometrije.
(Michael Ulerich, Odjel za kliničku kemiju, Sveučilište George August, Goettingen, Njemačka)

Prema istraživanju objavljenom u Clinical biochemist Reviews, upotreba tekućinskom kromatografijom visokog učinka zajedno s tandem masene spektrometrije (HPLC-MS / MS) u kliničkim laboratorijima enormno je porasla za vrijeme posljednjih godina, 10-12. Autori navode da se specifičnost analiza pomoću HPLC-MS / MS je značajno bolji imunoloških metoda i klasično tekućinske kromatografije visokog učinka (HPLC) za analize molekula male molekularne težine i ima znatno veću učinkovitost od spektrometrije plinsku kromatografiju mase (GC-MS). Popularnost ove metode u rutinskim kliničkim analizama sada je objašnjena jedinstvenim mogućnostima metode.

    Glavne prednosti HPLC-MS / MS metode su:

  • Mogućnost točne kvantitativne analize malih molekula;
  • Simultana analiza skupa ciljanih spojeva;
  • Jedinstvena specifičnost;
  • Analiza velike brzine.
  • Posljednjih godina mnogo je pažnje posvećeno vremenu analize, a time i povećanju laboratorijske produktivnosti. Značajno smanjenje vremena za analizu je moguće kroz korištenje kraćih stupaca za analitičke HPLC / MS / MS istodobno oštro povećati specifičnost testa. Korištenje atmosferskog tlaka ionizacije (API), tandem maseni spektrometar i poboljšanom tekućinskom kromatografijom visoke djelotvornosti, i srodnih postupaka dobivanja uzorka posljedicu HPLC-MS / MS u prvih redova modernijih analitičkih metoda za kliničke studije.

      Glavne aplikacije HPLC / MS / MS u kliničkoj medicini:

  • Dobivanje potpunog metabolizma profila steroida (panela), purina i pirimidina i drugih spojeva,
    screening novorođenčadi za kongenitalne metaboličke pogreške (otkrivanje nekoliko desetaka bolesti za jednu analizu);
  • Terapijski nadzor lijekova - imunosupresanti, antikonvulzivi, antiretrovirusni, antikoagulansi i bilo koji drugi - bez obzira na dostupnost kompleta proizvođača. Ne morate kupiti skupe setove za svaku tvar - možete razviti vlastite metode;
  • Klinička toksikologija - analiza više od 500 narkotičkih spojeva i njihovih metabolita u jednoj analizi, bez potvrdne analize
    proteomika i metabolomika.
  • Osim toga, HPLC IUMI koristi za probir oligosaharidove mokraćnog sulfatid dlinotsepochechnyh masne kiseline dlinotsepochechnyh žučne kiseline, metilmalonske kiseline, porfirijom studije, screening pacijenata s poremećajima purina i metabolizam pirimidina.

    Primjeri tekućinske kromatografije
    u kombinaciji s tandem masenom spektrometrijom u kliničkim analizama.

    Screening novorođenčadi: Prvi primjer masovne primjene HPLC-MS / MS u kliničkoj dijagnozi bio je screening kongenitalnih metaboličkih pogrešaka u novorođenčadi. Trenutno, u razvijenim zemljama, ovo je rutinska metoda i obuhvaća više od 30 različitih bolesti, uključujući acetaldehid, amino kiselost, oksidacijske nedostatke masnih kiselina. Posebno treba spomenuti studije o kongenitalnim defektima koji mogu dovesti do ozbiljnih problema ako se ne poduzmu neposredne mjere (npr. Povećana srca ili jetra ili edem mozga). Prednost korištenja HPLC-MS / MS za selekciju novorođenčadi je mogućnost simultane analize svih aminokiselina i acilkarnitina brzom, jeftinom i vrlo specifičnom metodom.

    Terapijski nadzor lijekova: Razvoj i uvođenje imunosupresivne sirolimus (rapamicin), za sprječavanje odbacivanja organa nakon transplantacije je glavni poticaj primjena HPLC-MS / MS u kliničkim laboratorijima. Suvremena HPLC-MS / MS postupak omogućuje simultano određivanje takrolimusa, sirolimusa, ciklosporina, everolimusa i mikofenskih kiselina.

    HPLC-MS / MS i koristi se za testove citotoksičnosti, antiretrovirusnih lijekova, triciklički antidepresivi, antikonvulzivi i drugim lijekovima koji zahtijevaju pojedinačnu dozu.

    HPLC-MSMS metodom omogućuje razdvajanje i kvantificiranje R- i S-enantiomera varfarina u koncentracijskom rasponu 0,1-500 ng / ml.

    Narkotičke i analgetske tvari: HPLC-MS / MS se široko upotrebljava za analizu tih spojeva zbog jednostavnosti pripreme uzorka i kratkog vremena analize. Trenutno, metoda se koristi u kliničkim laboratorijima za screening za prisutnost širokog spektra opojnih tvari. Jedinstvena specifičnost i osjetljivost metode omogućuje istodobnu analizu više od 500 spojeva različitih klasa u jednom uzorku uz minimalnu pripremu uzorka. Dakle, u slučaju analize urina, jednostavno razrjeđivanje uzorka je 50-100 puta. Kada se analizira kosa umjesto 100-200 kose, jedina kosa je dovoljna za pouzdano otkrivanje činjenica potrošnje narkotika.

    Endokrinologija i steroidna analiza: HPLC-MS / MS se široko koristi u mnogim laboratorijima za endokrinologiju za analizu steroida - testosterona, kortizola, aldosterona, progesterona, estriola i mnogih drugih.

    Sve više i više laboratorija počinje koristiti HPLC-MS / MS kako bi odredili razinu vitamina D3 i D2 u krvi.

    I. Određivanje steroida (steroidni profil).

    Laboratoriji u bolnicama i klinikama trenutno imaju priliku istodobno odrediti nekoliko steroida pomoću HPLC / MS / MS. To ne zahtijeva veliku količinu uzorka, što je osobito važno u analizi dječjih uzoraka.

      Slučajevi u kojima je poželjno napraviti definiciju nekoliko (profiliranje) steroida:

  • Kongenitalna nadbubrežna hiperplazija (kongenitalna nadbubrežna hiperplazija, CAH) je kongenitalni defekt steroidne biosinteze. To je nasljedna skupina bolesti uzrokovanih nepravilnom aktivnošću enzima adrenalnog korteksa, što dovodi do smanjenja proizvodnje kortizola. Za pouzdanu dijagnozu SAN-a, preporučuje se odrediti kortizol, androstenedion i 17-hidroksiprogesteron. HPLC / MS / MS omogućuje točnu kvantifikaciju svih tri steroida u jednom testu sa 100% pouzdanosti.
  • Rutinsko selekciju novorođenčadi pomoću imunoanalize karakterizira visoka razina pozitivnih i lažnih negativnih rezultata. Određivanje ne samo kortizola pomoću HPLC / MS / MS već i aldosterona i 11-deoksikortisola omogućuje razlikovanje primarne insuficijencije adrenalnog korteksa od sekundarnog.
  • HPLC / MS / MS omogućuje određivanje steroida u prostatisu i kroničnom sindroma boli zdjelice.
  • HPLC-MS / MS omogućuje vam određivanje profila steroida i prepoznavanje uzroka preranog puberteta povezane s nadbubrežnim korteksom u maloj djeci. Utvrđeno je da su koncentracije testosterona, androstenediona, dehidroepiandrosterona (DHEA) i njegovog sulfata u ovoj djeci nešto veće nego u starijoj djeci kontrolne skupine.
  • Seruma aktivnih pušača, pasivni pušača i nepušača je analiziran na prisustvo 15 steroidnih hormona i hormona štitnjače za ispitivanje odnosa između pacijenata izloženih dim i koncentracija hormona.
  • HPLC / MS / MS se koristi za profiliranje nekih ženskih steroidnih hormona u urinu.
  • Koristeći HPLC / MS / MS, koncentracije neuroaktivnih hormona su procijenjene kako bi se spriječila dijabetička neuropatija.
  • II. Određivanje hormona štitnjače

    Rutinske metode za određivanje hormona štitnjače obično se temelje na radioimunološkom testu, koji je skup i omogućuje određivanje samo T3 i T4, što može ograničiti sposobnost određivanja i potpuno regulacije funkcije štitnjače.

    • Trenutno pomoću HPLC analize IUMI istovremeno izvodi u pet uzoraka seruma hormona štitnjače uključujući tiroksina (T4), 3,3”, 5-trijodtironin (T3), 3,3', 5'(RT3), 3, 3'-dijodotironin (3,3'-T2) i 3,5-dijodotironin (3,5-T2) u koncentracijskom rasponu od 1 -500 ng / ml.
    • Metoda HPLC / MS / MS također se koristi za analizu sastavine hormona kod pacijenata koji su podvrgnuti tireoidektomiji. Određene su razine koncentracije tiroksina (T4), triiodotironina (T3), slobodnog T4 i stimulirajućeg hormona (TSH) nakon operacije. Utvrđeno je da je HPLC / MS / MS odličan način uspostavljanja odnosa između TSH i koncentracije hormona štitnjače.
    • Metoda HPLC / MS / MS korištena je za određivanje tiroksina (T4) u ljudskoj slini i serumu. Metoda je karakterizirana velikom brzinom ponovljivosti, točnosti i detekcije od 25 pg / ml. Istraživanja su pokazala da postoji dijagnostička ovisnost u koncentracijama T4 u slini između euthyroidnih bolesnika i bolesnika s Gravesovom bolesti.

    HPLC / MS / MS metoda trenutačno ima osjetljivost, specifičnost i točnost potrebnu za pouzdano određivanje svih steroida u biološkim tekućinama i time poboljšava dijagnostičke sposobnosti, posebno pri određivanju steroida.

    III. Određivanje 25-hidroksivitamina D pomoću HPLC / MS / MS

    25-hidroksi vitamin D (25OD) je glavni cirkulirajući oblik vitamina D i prekursor njegovog aktivnog oblika. (1,25-dihidroksivitamin D). Zbog dugog poluživota, definicija 25OD je važna za određivanje statusa vitamina D u pacijentovom tijelu. Vitamin D postoji u dva oblika: vitamin D3 (kolekalciferol) i vitamin D2 (ergokalciferol). Oba oblika se metaboliziraju u odgovarajuće 25OD oblike. Vrlo je važno za dijagnozu je prisutnost analitičkih metoda koje se mogu odrediti s visokom točnošću, oba oblika vitamina i omogućiti praćenje pacijenata s poremećajima vitamina D. primijenjenih metoda još uvijek ne dopuštaju posebno određivanje vitamina D2 i D3. Osim toga, pri visokim koncentracijama vitamina D2, otkrivena količina D3 je podcijenjena. Drugi nedostatak je uporaba radioaktivnih izotopa. Korištenje HPLC / MS / MS metode ne samo da spriječava uporabu radioaktivnih izotopa, već je također napravio zasebno određivanje oba aktivna oblika vitamina.

        Metoda je primjenjiva za sljedeće pacijente:

  • Ako postoji sumnja na smanjenje sadržaja vitamina D u tijelu;
  • Ako sumnja na neobjašnjen toksični učinak;
  • Pri ispitivanju bolesnika koji su podvrgnuti tretmanu zbog smanjenog sadržaja vitamina D;
  • Korištenje HPLC / MS / MS dozvoljeno je odvojeno određivanje oba oblika kod praćenja bolesnika.
  • IV. Određivanje imunosupresiva pomoću HPLC / MS / MS

    Nakon transplantacije organa, potrebno je uzimati imunosupresante tijekom cijelog života kako bi se izbjegle reakcije odbacivanja. S vrlo uskim terapijskim rasponom i visokom toksičnošću, imunosupresivi zahtijevaju individualnu dozu kako bi se postigao maksimalni učinak. Stoga je od vitalnog značaja pratiti glavne imunosupresive: ciklosporin A, takrolimus, sirolimus i everolimus za reguliranje doze lijeka za svakog pojedinog pacijenta, ovisno o koncentraciji lijeka u krvi.

    Imunotest se još uvijek koristi za praćenje navedenih lijekova, međutim ove metode su skupe i njihova specifičnost, točnost i reproducibilnost su ograničene. Bilo je slučajeva smrti pacijenata zbog nepravilnog doziranja imunosupresiva na temelju rezultata dobivenih imunološkim metodama. Trenutno, imunoanalize se zamjenjuju u kliničkim laboratorijima pomoću HPLC / MS / MS. Dakle, u klinici Sveučilišta u Münchenu, oko 70 uzoraka za sadržaj sirolimusa i ciklosporina A analizirano je dnevno pomoću HPLC / MS / MS sustava. Sva priprema uzoraka i kontrola uređaja obavlja jedan zaposlenik. Laboratorij se također prebacuje na analizu takrolimusa ovom metodom.

    • Opisana je upotreba HPLC / MS / MS za rutinsko istodobno određivanje takrolimusa, sirolimusa, askomicina, demetoksisirolimusa, ciklosporina A i ciklosporina G u krvi. Raspon je određen koncentracijom od 1,0 do 80,0 ng / ml. Za ciklosporin, 25 do 2000 ng / ml. Tijekom godine analizirano je više od 50.000 uzoraka u laboratoriju.
    • Budući da je utvrđeno da istodobna primjena takrolimusa i sirolimusa daje pozitivan terapeutski učinak, razvila se jednostavna i učinkovita HPLC / MS / MS metoda za odjeljivanje u krvi za kliničku analizu. Analiza jednog uzorka traje 2,5 minuta s točnošću 2,46% -7,04% za takrolimus i 5,22% -8,30% za sirolimus za cijelu analitičku krivulju. Donja granica odredivanja takrolimusa je 0,52 ng / ml, sirolimus - 0,47 ng / ml.

    V. Određivanje homocisteina pomoću HPLC / MS / MS

    Homocistein je interes za kardiovaskularne bolesti (tromboembolije, bolesti srca, ateroskleroza) i drugih kliničkih stanja (depresija, Alzheimerova bolest, osteoporoza, komplikacije trudnoće, i dr.). Postojeće metode za analizu homocisteina, uključujući imunoanalizu, su skupe. Razvijena je brza HPLC / MS / MS metoda za analizu homocisteina za rutinsku kliničku upotrebu u analizi velikog broja uzoraka. Ionizacija se izvodi elektrosprejom. Metoda je reproducibilna, vrlo specifična i točna. Prednosti metode su i niske cijene reagensa i jednostavnost pripreme uzoraka. U jednom danu moguće je analizirati 500 ili više uzoraka.

    zaključak

    Treba napomenuti da iako su trenutno koriste znatno poboljšane metode imuno, zbog tehničkih ograničenja u načelu, ova metoda će nikada imati usporedive HPLC IUMI točnost i specifičnost na ciljne tvari, osobito u prisutnosti metabolita. To ne dovodi samo do niske točnosti ELISA metode i visok postotak lažno-pozitivnih i lažno negativnih rezultata, ali također ne dopušta uspoređivanje rezultata dobivenih u različitim kliničkim jedinicama koristeći ELISA metodu. Primjena HPLC-MS / MS eliminira ovaj nedostatak, omogućuje vrlo specifičan, precizno i ​​brzo analizu velikog broja uzoraka s visokom pouzdanošću u prisutnosti metabolita i bez smetnji i prateće endogenih tvari u plazmi i u krvi bolesnika.

    Unatoč očitoj visokoj cijeni instrumenta kompleksa, kako svjetska praksa pokazuje, s pravilnim radom, ovaj kompleks plaća za sebe u 1-2 godina. To je prvenstveno zbog niske cijene jedne analize zbog istodobne analize desetaka i stotina veza i nedostatka potrebe za kupnjom skupih dijagnostičkih kompleta. Osim toga, laboratorij ima priliku da samostalno razvije sve potrebne tehnike analize i ne ovisi o proizvođaču kompleta.

    Izbor ispravne konfiguracije instrumenta klastera

    Postoje mnoge različite metode masene spektrometrije i vrste masovnih spektrometra namijenjenih za rješavanje raznih problema - strukturna identifikacija složenih proteinskih makromolekula težine u stotinama tisuća Daltona do rutinske visoke propusnosti kvantitativnu analizu malih molekula.

    Da bi se uspješno riješio zadatak, jedan od glavnih uvjeta je izbor prave vrste opreme. Ne postoji univerzalni uređaj koji omogućuje rješavanje čitavog spektra analitičkih problema. Stoga, instrument dizajniran za rješavanje problema identifikacije mikroorganizama nije sposoban za kvantitativnu analizu malih molekula. I obrnuto. Činjenica je da, unatoč općem imenu, to su apsolutno različiti uređaji koji djeluju na različitim fizičkim principima. U prvom slučaju, ovaj letni maseni spektrometar s laserskim izvorom ionizacije - MALDI-TOF, a drugi - trostruki kvadrupol s ionizacijom elektrosprejom - HPLC-MSMS.

    Drugi najvažniji parametar je izbor ispravne konfiguracije sustava. Postoji nekoliko glavnih proizvođača masovne spektrometrijske opreme. Uređaji svakog proizvođača imaju ne samo vlastite snage, već i slabosti, za koje obično više vole šutjeti. Svaki proizvođač proizvodi vlastitu liniju uređaja. Trošak jednog analitičkog kompleksa je u rasponu od 100.000 do 1.000.000 dolara ili više. Odabir optimalnog proizvođača i ispravnu konfiguraciju opreme neće samo uštedjeti značajna financijska sredstva već i učinkovitije riješiti zadatak. Nažalost, postoje brojni primjeri u kojima je napravljena laboratorijska oprema bez uzimanja u obzir tih čimbenika. Rezultat je nepristupačna oprema, trošenje novca.

    Treći faktor koji određuje uspješan rad laboratorija je osoblje. Maseni spektrometri zahtijevaju visoko kvalificirano osoblje. Nažalost, u bilo kojem sveučilištu naravno Rusija nije moderna praksa spektrometrije mase, osobito za kliničke primjene, a ciljevi obuke svakog laboratorija mora riješiti na vlastitu. Naravno, 2-3 dana obuke o upoznavanju proizvođača nakon početka opreme nije sasvim dovoljno za razumijevanje osnove metode i stjecanje vještina rada na uređaju.

    Četvrti je čimbenik nedostatak gotovih tehnika analize. Svaki laboratorij ima svoje prioritete, za rješavanje kojih je potrebno razvijati vlastite metode. To može učiniti osoba koja ima najmanje 2 do 3 godine iskustva u radu na uređaju. Proizvođači tvrtki ponekad daju jednu ili dvije opće metode preporuke, ali ih ne prilagođavaju za specifične zadatke laboratorija.

    U BioFarmExpert LLC stručnjaci za rad s dugogodišnjim iskustvom na raznim vrstama masenih spektrometara, te razvoj tehnika i postavljanje analiza visokih performansi. Stoga pružamo sljedeće usluge:

    1. Odabir optimalne konfiguracije uređaja za određene zadatke klijenta.
    2. Kupnja, isporuka i puštanje u rad opreme vodećih proizvođača tandem masenih spektrometara. Postupno osposobljavanje osoblja u roku od godinu dana od trenutka pokretanja opreme.
    3. Skup gotovih tehnika i baza podataka za rješavanje osnovnih kliničkih problema.
    4. Razvoj analitičkih tehnika i rješavanje specifičnih zadataka klijenta u njegovom laboratoriju uz sudjelovanje njegovog osoblja.
    5. Metodička podrška u svim fazama rada.

    Analiza krvi s preliminarnom derivatizacijom (TMS-derivati)

    Dvodimenzionalna plinska kromatografija - vrijeme leta masene spektrometrije za analizu krvne plazme s preliminarnom derivatizacijom (TMS derivate) koji pokazuju određivanje glukoze 5TMS

    Analiza metabolita krvne plazme pomoću dvodimenzionalne plinske kromatografije - vremenska letna masena spektrometrija s preliminarnom derivatizacijom (TMC derivati) pokazuje detekciju 5TCS glukoze s veličinom od 901 slučajnosti.