Veterinarske tehnologije

Napajanje

Princip. Proteini reagiraju u lužnatom mediju sa sumpornim bakrom; stvarajući tako spojeve obojane u ljubičastoj boji.
Reagensi. 1. 0.9% -tna otopina natrij klorida.
0,2 N; (0,2 mol / l) otopina natrij hidroksida, bez ugljičnog dioksida. 8 tona tvar unese u odmjernu tikvicu od 1 litre i izlije do oznake destiliranom vodom, kuhana ili pripravljen iz 1N. (mol / 1) kaustične otopine sode: 20 ml 1 N solne kiseline. Otopina NaOH dovede se u 100 ml s kuhanom destiliranom vodom.
3. Biuretni reagens je osnovni. 4,5 g Rochelle-ove soli (KNaS4N4O6) otopljeno je u volumetrijskoj boci od 100 ml na 40 ml 0,2 N. otopina kaustične sode. Nakon otapanja doda se 1,5 g bakrenog sulfata (CuS04 * 5H20) i 0,5 tona kalijevog jodida (KI). Miješati dok se potpuno otopi i dovede do 100 ml 0,2 N. otopina kaustične sode. Pohranite u zdjelu od tamnog stakla. Reagens je stabilan. 4. 0.5% -tna otopina kalijevog jodida u 0.2 N. otopina kaustične sode. 2,5 g kalij jodida se doda u volumetrijsku tikvicu od 500 ml i napuni do oznake od 0,2 N. otopina kaustične sode. Pohranite u zdjelu tamnog stakla ne duže od 2 tjedna.
5. Radna otopina reagenta biureta. Pomiješajte jedan dio osnovne otopine biureta (3) s četiri dijela 0,5% -tne otopine kalij jodida (4). Čuvajte u hladnjaku u tamnim jelima ne više od 2 tjedna.
6. Standardna otopina albumina, osnovna. Cijev je izrađena od 1 g kristalnog seruma (od čovjeka ili goveđi serum albumin) i 9 ml 0,9% natrij hlorpstogo otopine. Dobro promiješajte. 1 ml otopine sadrži 0,1 g proteina. Čuvati u hladnjaku. Serumski albumin trebao bi zadovoljiti zahtjeve standarda.
Oprema. photoelectrocolorimeter; izmjerene su žarulje.
Tijek definicije. U 0,1 ml krvnog seruma dodati 5 ml radne otopine biuretnog reagensa, pomiješati, izbjegavajući stvaranje helija. Nakon 30 minuta (ali ne nakon 1 sat), mjerena je optička gustoća pri FEKe u kiveti debljine sloja od 1 cm, pri valnoj duljini od 540-560 nm (zeleno filter) naspram kontrole (5 mL radi otopina biuretnim reagensa i 0.1 ml 0, 9% -tna otopina natrij klorida).
Izračun se provodi prema rasporedu kalibracije za izradu standardnih standardnih otopina osnovne standardne otopine od 10% proteina (Tablica 5).
5. Priprema standardnih proteinskih otopina
Od svakog (od 4) razrjeđenja u 5 epruveta, dodano je i obrađeno 0,01 ml otopine albumina, kao i krvni serum.
Mjerenja optičke gustoće standardnih otopina počinju s otopinom najniže koncentracije. Iz dobivenih prosječnih podataka izrađena je kalibracijska krivulja od 5 određivanja. Kalibracijska krivulja provjerava se povremeno.
Primjer h n e i i. 1. Sadržaj proteina standardne otopine trebao bi biti najmanje 7%. 2. Kada je sadržaj proteina u serumu više od 10% zadnji fiziologvcheskim razrijeđenom otopinom 1: 1, rezultat noža pomnožen sa dva. Pogreška metode 2%.
Izvor: Klinička laboratorijska dijagnostika u veterini: Referentna knjiga / IP. Kondrakhin, N.V. Kurilov, A.G. Malakhov i dr. -M: Agropromizdat, 1985.-287p.

Laboratorijska dijagnostika

Brzo pretraživanje na web mjestu

Dijelite na društvenim mrežama

Pročitajte nas na:

Pronašli ste pogrešku? Odaberite ga mišem i istodobno istovremeno pritisnite Ctrl + Unesite Orphus sustav

Metode za određivanje ukupnog proteina u serumu

Referentne vrijednosti koncentracije ukupnog proteina u serumu su 65-85 g / l

2. Određivanje specifične težine seruma

3. Težina (gravimetrijska), kada se precipitiraju proteini krvi, osuše do konstantne težine i paze na analitičke ljuske.

1. Refraktometar IRF-454B2M

je namijenjen određivanju proteina u krvnom serumu, cerebrospinalnoj tekućini, kontroli koncentracije lijeka, mjerenju gustoće urina.

2. Cobas integra - Total Protein Gen.2

Načelo ispitivanja: dvovalentni bakar reagira u alkalnoj otopini s proteinskim peptidnim vezama da bi se formirao karakterističan kompleks biureta u ljubičastoj boji.

3. Određivanje proteinske frakcije krvnog seruma elektroforezom na celuloznom acetatu.

Puferska otopina namijenjena je elektroforetskoj odvajanju serumskih proteina na membranama celuloznog acetata, nakon čega slijedi denzitometrijsko određivanje proteinske frakcije.

Princip elektroforetskog razdvajanja proteina temelji se na različitoj brzini kretanja molekula serumskih proteina u konstantnom električnom polju određenog intenziteta. Odijeljene frakcije proteina su obojene s bojilom. Intenzitet obojenja proteinske frakcije je proporcionalan njihovom broju.

Krvni serum, bez hemolize, lipemije, a ne icteric. Proteinske frakcije krvnog seruma su stabilne u čvrsto zatvorenoj epruveti 18-25 ° C tijekom 8 sati, na 2-8 u 3 dana, na 20 ° C tijekom 1 mjeseca.

1. Elektroforeza

1.1. nježno sušene membrane stavljene na površinu pufera za elektroforezu, izbjegavajući njihovu brzu uranjanja i upijaju se do potpuno vlažne. Namočite brtvljene membrane blago između listova gustog filtar papira, čime se onemogućuje isušivanje. Prije primjene uzoraka preporuča se provesti fazu prije izrezivanja. Da bi to učinili, membrana treba staviti u komoru za elektroforezu i uključiti struju u odabranom načinu rada 10 minuta. Faza prethodno izrezanih može se zamijeniti dugim nalijevanjem membrane u otopini pufera (nekoliko sati).

1.2. uz pomoć aplikatora primjenjuju analizirane uzorke seruma na udaljenosti od 2-3 cm od katodnog ruba membrane. Postavite membranu u elektroforetsku komoru i spojite struju.

2. Obrada elektroforegrama

2.1. colorant Crimson S.

Nakon isključivanja struje pažljivo prenesite membranu na otopinu boje za 3-5 minuta, zatim dvaput tijekom 3 minute u 5-7% otopini octene kiseline (prije bijeljenja pozadine).

1.2. Elektrofororam treba obrađivati ​​pomoću skenera i računalnog programa.

4. Tim uzorak

Serumski beta-globulin, gama globulin i lipoproteini istaloženi su pri pH 7.55 s timolskim reagensom. Ovisno o količini i uzajamnom omjeru proteinske frakcije, u reakciji se razvija mutnoća, intenzitet koji se mjeri turbidimetrijski.

Timolovaya test je prikladniji za funkcionalno ispitivanje jetre od uzoraka otpornih na koloid. Smatra se da je pozitivno u 90-100% slučajeva Botkinove bolesti (već u pre-artritisnoj fazi i bez anusa) i toksičnim hepatitisom. Reakcija je pozitivna za post-hepatitis i postnecko, posebno icteričnu cirozu (za razliku od drugih oblika ciroze), s kolagenskim bolestima, malarijama i virusnim infekcijama. Kod mehaničke žutice, to (u 75% slučajeva) je negativno, što ima diferencijalnu dijagnostičku vrijednost.

Kod mehaničke žutice, uzorak postaje pozitivan samo ako je proces kompliciran parenhimskim hepatitisom. Za razlikovanje mehaničke žutice od parenhimata, vrlo je važno korištenje uzorka timola s Bursteinovim testom (za beta i pre-betalapoproteine).

Kod parenhimalne žutice, oba uzorka su pozitivna, s mehaničkom žuticom, test timola je negativan, Bursteinov test je oštro pozitivan.

Ukupni protein

Sve poznate metode za određivanje koncentracije ukupnog proteina podijeljene su u sljedeće skupine:

1. Azotometrijski, na temelju određivanja količine proteinskog dušika, kako bi se pronašla koncentracija proteina, proizlazi iz činjenice da je sadržaj dušika u proteina 16%, pa se koristi koeficijent 6.25. Metoda je netočna, jer sadržaj dušika različitih molekula proteina varira od 14 do 19%.

2. Postupci koji se sastoje od određivanja gustoće seruma - metoda plutajućeg kapanja, također su netočni uslijed utjecaja na gustoću drugih tvari prisutnih u serumu.

3. Težina (gravimetrijska) - vrlo naporno i zahtijevaju velike količine seruma.

4. Refraktometrijske metode - jednostavne izvedbe, ali netočne, budući da se lom seruma uvjetuje i mineralnim tvarima i ugljikohidratima.

5. Kolorimetrija, temeljena na reakcijama boja proteina:

  • metode temeljene na boje nespecifično vezivanje (jednostavne apsorpcije) su osjetljivi dovoljno, ali stupanj vezanja boje ovisi o individualnim svojstvima proteina (metoda Coomassie Brilliant Blue).
  • biuret ispitivanje - najkorišteniji danas, u odnosu na specifične reakcije peptidne veze s iona bakra u alkalnom mediju da se dobije purpurna produkt. Postoje razne modifikacije ove metode s ciljem povećanja intenziteta boje i njegove stabilnosti, povećavajući stabilnost reagensa. Na primjer, tartarat doda se kao stabilizator, koji nakon kompleksa s iona bakra sprječava njihovo sedimentaciju u alkalnom mediju, KJ sprječava spontanog oporavka alkalni bakra tartarata i deponiranje bakreni oksid i time poboljšava stabilnost reagensa. Osjetljivost i specifičnost metode ovisi o korištenoj valnoj duljini: 540-580 nm, 263 nm ili 310 nm. Postupak se smatra vrlo specifični i precizna, jer prisutnost aromatskih aminokiselina, fenoli, mokraćna kiselina ne utječe na reakciju biuret.
  • Lowry - na temelju stvaranja tungsten i molibden blue bojom s fosfomolibdenskom i phosphotungstic soli reagensa Folin Chikolte reakcijom s aromatskim aminokiselinama, tirozinu općenito, a određeni doprinos triptofan, histidin, cistein. Maksimalna apsorpcija je u rasponu od 745-750 nm. U radnom reagensu postoji biuretni reagens, koji također omogućuje određivanje peptidnih veza. Nedostaci metode su: prvo, negativan utjecaj na razvoj boje materijala se koristi za izolaciju, pročišćavanje i topljivosti proteina (detergenta, puferskih sustava, komponente i drugih sulfhidrilnim redukcijskim sredstvima, purine, glicin, saharoza, amonijev sulfat i slično); drugo, odsutnost linearne ovisnosti intenziteta boje na količinu standarda proteina. Metoda je osjetljivija od biuretom, ali njihova specifičnost je niži, što intenzitet boje pripravka ovisi o protein amino kiselina i sekvence aminokiselina i stupnju oklop funkcionalne skupine.

6. Nepelometrijske metode.

7. Polarimetrijske metode.

8. Spektrofotometrijska sastoji u mjerenju stupnja cvetopogloscheniya u ultraljubičastom području na dvije valne duljine s daljnjim izračuna prema posebnim formulama (230 i 260 nm, 280 nm i 260, 235 i 280 nm, 215 nm i 225, 280 i 205 nm).

Jedinstvene metode

Jedinstvene metode za određivanje ukupnog proteina su:

  • u krvnom serumu - metoda biureta;
  • u urinu, polukvantitativna metoda Brandenburg-Roberts-Stol'nikov i nephelometrija (590-650 nm) nakon reakcije sa sulfosalicilnom kiselinom;
  • u tekućini - nephelometriji (410-480 nm) nakon reakcije sa sulfosalicilnom kiselinom i natrijevim sulfatom;
  • u tekućini ozbiljnih šupljina - nephelometrija (590-650 nm) nakon reakcije sa sulfosalicilnom kiselinom.

Određivanje količine ukupnog proteina
u krvnom serumu upotrebom biuretske metode

načelo

Bjelančevine reagiraju u alkalnom mediju s bakrenim sulfatom, formirajući kelate spojeve ljubičaste boje. Intenzitet boje je proporcionalan broju peptidnih veza.

Metode za određivanje ukupnog proteina u serumu

Referentne vrijednosti koncentracije ukupnog proteina u serumu su 65-85 g / l

2. Određivanje specifične težine seruma

3. Težina (gravimetrijska), kada se precipitiraju proteini krvi, osuše do konstantne težine i paze na analitičke ljuske.

1. Refraktometar IRF-454B2M

je namijenjen određivanju proteina u krvnom serumu, cerebrospinalnoj tekućini, kontroli koncentracije lijeka, mjerenju gustoće urina.

2. Cobas integra - Total Protein Gen.2

Načelo ispitivanja: dvovalentni bakar reagira u alkalnoj otopini s proteinskim peptidnim vezama da bi se formirao karakterističan kompleks biureta u ljubičastoj boji.

3. Određivanje proteinske frakcije krvnog seruma elektroforezom na celuloznom acetatu.

Puferska otopina namijenjena je elektroforetskoj odvajanju serumskih proteina na membranama celuloznog acetata, nakon čega slijedi denzitometrijsko određivanje proteinske frakcije.

NAČELO METODE

Princip elektroforetskog razdvajanja proteina temelji se na različitoj brzini kretanja molekula serumskih proteina u konstantnom električnom polju određenog intenziteta. Odijeljene frakcije proteina su obojene s bojilom. Intenzitet obojenja proteinske frakcije je proporcionalan njihovom broju.

ANALIZE UZORAKA

Krvni serum, bez hemolize, lipemije, a ne icteric. Proteinske frakcije krvnog seruma su stabilne u čvrsto zatvorenoj epruveti 18-25 ° C tijekom 8 sati, na 2-8 u 3 dana, na 20 ° C tijekom 1 mjeseca.

PROVJERA ANALIZE

1. Elektroforeza

1.1. nježno sušene membrane stavljene na površinu pufera za elektroforezu, izbjegavajući njihovu brzu uranjanja i upijaju se do potpuno vlažne. Namočite brtvljene membrane blago između listova gustog filtar papira, čime se onemogućuje isušivanje. Prije primjene uzoraka preporuča se provesti fazu prije izrezivanja. Da bi to učinili, membrana treba staviti u komoru za elektroforezu i uključiti struju u odabranom načinu rada 10 minuta. Faza prethodno izrezanih može se zamijeniti dugim nalijevanjem membrane u otopini pufera (nekoliko sati).

1.2. uz pomoć aplikatora primjenjuju analizirane uzorke seruma na udaljenosti od 2-3 cm od katodnog ruba membrane. Postavite membranu u elektroforetsku komoru i spojite struju.

2. Obrada elektroforegrama

2.1. colorant Crimson S.

Nakon isključivanja struje pažljivo prenesite membranu na otopinu boje za 3-5 minuta, zatim dvaput tijekom 3 minute u 5-7% otopini octene kiseline (prije bijeljenja pozadine).

1.2. Elektrofororam treba obrađivati ​​pomoću skenera i računalnog programa.

4. Tim uzorak

Serumski beta-globulin, gama globulin i lipoproteini istaloženi su pri pH 7.55 s timolskim reagensom. Ovisno o količini i uzajamnom omjeru proteinske frakcije, u reakciji se razvija mutnoća, intenzitet koji se mjeri turbidimetrijski.

Timolovaya test je prikladniji za funkcionalno ispitivanje jetre od uzoraka otpornih na koloid. Smatra se da je pozitivno u 90-100% slučajeva Botkinove bolesti (već u pre-artritisnoj fazi i bez anusa) i toksičnim hepatitisom. Reakcija je pozitivna za post-hepatitis i postnecko, posebno icteričnu cirozu (za razliku od drugih oblika ciroze), s kolagenskim bolestima, malarijama i virusnim infekcijama. Kod mehaničke žutice, to (u 75% slučajeva) je negativno, što ima diferencijalnu dijagnostičku vrijednost.

Kod mehaničke žutice, uzorak postaje pozitivan samo ako je proces kompliciran parenhimskim hepatitisom. Za razlikovanje mehaničke žutice od parenhimata, vrlo je važno korištenje uzorka timola s Bursteinovim testom (za beta i pre-betalapoproteine).

Kod parenhimalne žutice, oba uzorka su pozitivna, s mehaničkom žuticom, test timola je negativan, Bursteinov test je oštro pozitivan.

Opći protein, njegov značaj i metode određivanja (Stranica 1 od 2)

MUSE «PRVOM GRADSKOM KLINIČKOJ BOLNICI AMBULANCE SERVICE»

SVEUČILIŠNA SURADNJA SUSTAVA MEDICINE

PREDMET KLINIČKIH LABORATORIJSKIH DIJAGNOSTIKA

Opći protein, njegov značaj i metode za određivanje

Arkhangelsk, 2008

Proteini krvne plazme

Metode za određivanje ukupnog proteina u serumu

Popis korištenih literature

Proteini su spojevi koji sadržavaju dušik visoke molekulske strukture koji se sastoje od više od 20 vrsta alfa-aminokiselina. Uvjetna granica između velikih polipeptida i proteina je molekularna težina od 8000-10000. Plazma proteini se sintetiziraju prvenstveno u stanicama jetre, plazme, limfnim čvorovima, slezeni i koštanoj srži.

Plazma ljudske krvi sadrži više od 100 različitih bjelančevina, različite od podrijetla i funkcija. Od 9-10% suhog ostatka krvne plazme udio proteina je 6,5-8,5%.

· Jednostavni (proteini) (sadrže samo aminokiseline)

· Složeni (proteidi) (aminokiseline i ne-aminokiselinske komponente: hem, vitaminski derivati, lipidi ili ugljikohidrati)

· Fibrilar (formiranje mnogih gusta tkiva)

Globularni (albumini (4-5%), globulini (2-3%), fibrinogena (0,2-0,4%)

Postoje sljedeće funkcionalne skupine proteina:

- Transportni proteini (transferin)

- Proteini akutne faze (C-reaktivni protein)

- Proteini akutne faze (albumin, transferrin)

- Faktori komplementa i zgrušavanja (komplement C4, faktor VIII)

- Antifenziju (antitrombin III)

- Proteini, čije funkcije nisu dovoljno proučavane (alfa-glikoproteinska kiselina)

Fiziološka funkcija proteina plazme je održavanje koloidnog osmotskog tlaka, kapacitet pufera plazme, u nekim slučajevima - skladištenje lipidnih molekula, metaboličkih proizvoda, hormona, lijekova i elemenata u tragovima. Neki proteini plazme obavljaju enzimsku funkciju, imunoglobulini provode humoralnu imunost. Komponente komplementa i C-reaktivni protein važni su za provedbu nespecifične rezistencije, posebno u slučaju bakterijskih infekcija. Ravnoteža između faktora i inhibitora koagulacije osigurava tekuće stanje krvi u normi i brzu koagulaciju u slučaju traume

Proteini krvne plazme

Normable vrijednost 56,5-66,8 (Na albumina račune serum za oko 60% od ukupnih proteina sintetiziranih u jetri albumina (oko 15g / dan), a njihova je vrijeme poluraspada oko 17 dana u plazmi onkotskog pritiskom zbog 65-80% albumin Albumini rad... prijevoz važnu funkciju mnogih biološki aktivnih tvari, posebno hormona. Oni su sposobni vezati se za kolesterol, bilirubin. mnogo kalcija u krvi je također povezan s albumin. albumin u mogućnosti da se vežu s različitim lijekovima.

Kvalitativne i kvantitativne promjene albumina u plazmi su moguće. Kvalitativne promjene albumina vrlo su rijetke zbog homogenog sastava ove proteinske frakcije; kvantitativne promjene se manifestiraju hiper- i hipoalbuminemijom.

Hiperalbuminemija se opaža s dehidracijom kod teških ozljeda, s opsežnim opeklinama, kolerom.

Hipoalbuminemija je primarna (u novorođenčadi kao rezultat nezrelosti jetrenih stanica) i sekundarna, zbog različitih patoloških stanja, sličnih onima koji uzrokuju hipoproteinemiju. Kod smanjenja koncentracije albumina, hemodilacija također može igrati ulogu, na primjer, u trudnoći. Smanjenje sadržaja albumina ispod 22-24 g / l popraćen je razvojem plućnog edema.)

· Alfa 1 - 3.5 - 6.0 (glavne komponente ove frakcije uključuju α1 -antitrypsin, a1 lipoprotein, kiselina α1 - glikoprotein) (Promjena frakcije α1 - globulini se promatraju u akutnom, subakutnom, pogoršanju kroničnih upalnih procesa; oštećenje jetre; svi procesi propadanja tkiva ili stanične proliferacije. Smanjenje α1 - globulin se opaža s nedostatkom α1 - antitripsin, hipo-α1 lipoproteinemija.)

· Alfa 2 - 6,9 - 10,5 (frakcija sadrži α2 - makroglobulin, haptoglobin, alipoproteini A, B (apo-A, apo-B), C, ceruloplazmin) (povećanje a2 - globulin se promatra u svim tipovima akutnih upalnih procesa, naročito s naglašenim eksudativnim i purulentnim karakterom (upala pluća, empiema pleure, druge vrste purulentnih procesa); bolesti povezane s uključenjem vezivnog tkiva u patološkom procesu (kolagenoze, autoimune bolesti, reumatskih bolesti); maligni tumori; u fazi oporavka od toplinskih opeklina; nefrotski sindrom; hemoliza krvi in ​​vitro. Smanjenje frakcija se opaža kod dijabetes melitusa, pankreatitisa (ponekad), kongenitalne žutice mehaničkog porijekla kod novorođenčadi, toksičnog hepatitisa. K α2 Globulini uključuju većinu proteina akutne faze. Povećanje njihovog sadržaja odražava intenzitet reakcije stresa i upalnih procesa u navedenim vrstama patologije.

· Beta - 7.3 - 13.0 (β-frakcija sadrži transferin, hemopexin komplementa komponente, imunoglobulin i lipoproteini) (povećanje beta globulin frakcije se detektira primarne i sekundarne hiperlipoproteinemije, bolesti jetre, nefrotski sindrom, krvarenje čira, hipotiroza Snižavanje sadržaja vrijednost. beta-globulin je detektiran s gopo-beta-lipoproteinemijom.

· Gama - 12,8-19,0 ​​(γ-frakcija sadrži Ig (IgG, IgA, IgM IgD, IgE), čime se povećava sadržaj y-globulina ukazuju na reakcijskom sustavu imunitet kada izlazna AT i autoantitijela: u virusnih i bakterijskih infekcija, upala,. collagenosis, degradacija tkiva i mnogo opekline hipergamaglobulinemijom odražava upalno djelovanje postupak je tipičan za kronično aktivan hepatitis i ciroza jetre Povećanje frakcija y -. globulina promatrana u 88-92% bolesnika s kroničnim aktivnim hepatitisom (u kojoj je 60-65% pacijenata je vrlo izrazio -. 26 g / l, a iznad) su gotovo iste promjene uočene u bolesnika s visokom aktivnošću i napredni ciroze jetre, a često γ-globulina sadržaj prelazi na sadržaj albumina, što se smatra loša prognostički znak.

U nekim bolestima moguće povećane sinteze proteina, koji spadaju u γ-globulin frakcije, a pojavljuju se u krvi patološkim proteina - paraproteins koja je otkrivena od elektroforeze. Kako bi se pojasnio priroda tih promjena, potrebna je imunoelektroforeza. Slične promjene zabilježene su u myeloma, Waldenstromovoj bolesti.

Povećanje razine u krvi y-globulina također zabilježen u reumatoidni artritis, lupus, kronične limfocitne leukemije, endotelioma, osteosarkom, kandidijaza.

Redukcija sadržaja γ-globulina je primarna i sekundarna.

Postoje tri glavne vrste primarne hipogamaglobulinemije: fiziološke (u djece u dobi od 3-5 mjeseci), srodne i idiopatske. Uzroci sekundarne hipogamaglobulinemije mogu biti brojne bolesti i stanja koja dovode do osiromašenja imunološkog sustava.

Usporedba smjeru promjene sadržaja albumina i globulina na ukupne promjene sadržaja proteina osigurava osnovu za sklapanje tog albuminosis često povezane s hyperglobulinaemia, dok hipoproteinemija je obično zbog hipoalbuminemije. U prošlosti, često koristi izračun omjera albumina-globulin, odnosno udio frakcije albumina u iznosu od globulin frakcije. Obično je ta brojka 2,5-3,5. U bolesnika s kroničnim hepatitisom i ciroze jetre, taj omjer se smanjuje na 1,5 do 1, a čak i smanjenjem albumin i globulin frakcije povećati. U posljednjih nekoliko godina, sve više i više pozornosti posvećuje definiranju sadržaja prealbumin, osobito u teškim bolesnicima intenzivne njege na parenteralnu prehranu. Smanjenje koncentracije prealbumina - rano i osjetljivo ispitivanje nedostatka proteina u tijelu bolesnika.)

Koeficijent A T se obično koristi kao indeks omjera albumina prema globulinu.

Promjene u ovom koeficijentu mogu se promatrati s cirozom, glomerulonefritisom, nefrotičkim sindromom, akutnim hepatitisom, sistemskim lupus erythematosusom.

Koncentracija proteina u krvnoj plazmi ovisi o omjeru brzine njihove sinteze i izlučivanja iz tijela, kao i volumena raspodjele.

Mnogi se proteini formiraju u jetri, stanice plazme i limfociti sintetiziraju imunoglobuline, makrofagi su proteini komplementarnog sustava. Pasivni gubitak bjelančevina s malom molekularnom težinom javlja se kroz bubrežni glomeruli i crijevni zid. Neki od tih proteina prolaze kroz reapsorpciju ili su zarobljeni i cijepani u crijevnoj sluznici. Većina proteina plazme nakon njihova hvatanja pinocitozom katabolizirana su u endotelnim stanicama kapilara ili mononuklearnih fagocita.

Fiziološke uloge proteina krvi su brojni, a glavni su sljedeći:

· Održavanje koloidno-onkotskog tlaka, održavanje volumena krvi, vezanje vode i držanje, ne dopuštajući da napuste krvotok;

· Sudjelovati u koagulaciji krvi;

· Održavati postojanost Rn krvi, stvarajući jedan od puferskih sustava krvi;

· Spajanje s brojnim tvarima (kolesterol, bilirubin, itd.), Kao i lijekovima, isporučuju se u tkivo.

· Održavanje normalne razine krvi kationa tvorbom spojeva s njima undialyzed (npr 40-50% kalcija u serumu, zbog proteina, značajan dio željeza, bakra, magnezija i drugih elemenata u tragovima su povezane s proteinima);

4. Određivanje ukupnog proteina u krvnom serumu prema reakciji biureta

Određivanje ukupnog proteina biuretskom reakcijom je daleko najčešći način određivanja ukupnog proteina u serumu. Metoda je relativno jeftina, jednostavna, ima dobru reproducibilnost i specifičnost, njegova upotreba omogućava istraživanje na analizatorima (automatski i poluautomatski) i na konvencionalnom fotometru.

Bjelančevine reagiraju u lužnatom mediju s bakrenim sulfatom kako bi nastali kompleksni spojevi obojani u ljubičastoj boji. Intenzitet bojenja, koji je proporcionalan količini proteina, određuje njegov sadržaj u krvnom serumu.

Utvrditi ukupni protein krvi biuretskom reakcijom, poželjno je ujutro uzeti krv na prazan želudac.

Natrijev klorid, ppm a. ili x. h, 154 mmol / 1 (izotonična otopina): 9 g natrijevog klorida se stavi u volumetrijsku tikvicu od 1 litre, otopi u vodi i dovede do oznake vodom.

Natrijev hidroksid, pbw a. ili x. h, 0,2 mol / l: 8 g natrijevog hidroksida stavljeno je u volumetrijsku tikvicu od 1 litre, pažljivo otopljeno u vodi i dovedeno do oznake vodom.

Kalij jodid, ch. ili x. h, 30 mmol / l kalijevog jodida u 0,2 otopine mol / l otopine natrijevog hidroksida :. 0.5 g kalij jodida se stavi u odmjernu tikvicu od 100 ml, podesi na 0,2 mol / l otopine natrijevog hidroksida do oznake i otopi. Reagens je stabilan tijekom 2 tjedna kada je pohranjen u tamnoj staklenoj posudi.

Kalij-natrij tartarat 4-voda (Rochelle sol), str.

Bakarni sulfat 5 sati vode. ili x. h.

Biuret reagens: 4,5 g Rochelle soli se otopi u 40 ml 0,2 mol / 1 natrijevog hidroksida, doda se 1,5 g bakrenog sulfata i 0,5 g kalijevog jodida i otopi se. Razrijediti do 100 ml s 0,2 mol / l otopinom natrijevog hidroksida. Reagens je stabilan ako je pohranjen u tamnom staklu ne više od mjesec dana.

Radna otopina reagensa biureta: 20 ml biuretnog reagensa pomiješa se s 80 ml 0.5% otopine kalijevog jodida. Reagensi se čuvaju na tamnom mjestu ne dulje od 2 tjedna.

Otopina kalibriranje albumin (s ljudskom ili goveđi serum) - 100 g / l albumina u 154 mmol / l otopine natrijevog klorida: 1 g humanog albumina ili goveđeg seruma, otopljenog u 6 - 7 ml 0,9% -tne otopine natrijevog klorida i izotonične podesi otopina natrijevog klorida do volumena od 10 ml; 1 ml standardne otopine sadrži 0,1 g proteina.

Materijal za istraživanje

Serum i plazma mogu se koristiti za analizu. U ovom slučaju obično se dobivaju usporedivi rezultati, iako je zbog prisutnosti fibrinogena razina ukupnog proteina u plazmi 2-4 g / l veća nego u serumu.

Određivanje sadržaja bjelančevina u serumu dobivenih u vakuumskim sustavima sa i bez odvajanja gela daje usporedive rezultate. Nije bilo značajne razlike u količini bjelančevina u uzorcima krvi prikupljenim u staklenim ili plastičnim vakuumskim sustavima.

Proučavati ne treba koristiti hemolizirani seruma, kao i hemoglobina je protein i da će se pridružiti biuret reakcija, što će dovesti do lažno povišenim testu: Prisutnost hemoglobina dovodi do viših od 3% za svaku 1 g / L slobodne hemoglobina u serumu.

Neželjeno je koristiti chlous serum, jer će optički utjecati na rezultate određivanja zbog zamućenosti i time dovesti do lažnog precijenjenog rezultata. Kako bi se uklonile smetnje uzrokovane značajnom lipemijom, koristi se ekstrakcija s dietil eterom. Uz neznatnu prisutnost lipida, moguće je provesti studiju postavljanjem "praznog" na pacijentov uzorak, ili razrijediti uzorak izotoničnom otopinom natrijevog klorida i zatim višestruko povećati rezultat razrjeđivanjem.

Interferirajući učinak ima bilirubin u koncentraciji većoj od 85 μmol / l. Stoga, u slučaju hiperbilirubinemije, bilo serumsko razrjeđenje ili "prazno" postavljanje se koristi za pacijentov uzorak.

U nekim slučajevima, lijekovi koji se koriste za liječenje, osobito kod teških bolesnika, mogu ometati reakciju. Na primjer, dekstrani, upotrijebljeni kao otopine za zamjenu plazme, tvore kompleks s bakrom i tartaratom u reakcijskoj smjesi i dovode do stvaranja lomljivog plavog precipitata. Stupanj intervencije ovisi o koncentraciji dekstrana i sastavu biuret reagensa. Kada se količina dekstrana obično daje, vrijednost pogreške može biti od 3 do 50%. Vjeruje se da dodavanje glicerina u reagens ili upotrebu niske koncentracije NaOH može spriječiti dextransku interferenciju tijekom reakcije. Prisutnost amonijevih iona u uzorku može potaknuti formiranje amonijevih kompleksa s bakrenim ionima, dovodeći do smanjenja koncentracije bakarskih iona u reakcijskom mediju i, prema tome, smanjenju brzine reakcije i lažnim negativnim rezultatima. U rijetkim slučajevima, intervencija lijekova u serumu je takva da kada biuret reagira u interakciji sa serumom, promatra se ili razvitak boje različitog od ljubičice ili pojave zamućenosti. Nemoguće je procijeniti količinu proteina u takvom serumu.

Ukupni sadržaj proteina je stabilan u serumu i plazmi tijekom 1 tjedna na sobnoj temperaturi i najmanje 2 mjeseca na -20 ° C

Tijek određivanja ukupnog proteina u serumu prema biuretskoj reakciji

Ispitni uzorak: U 0,1 ml seruma, dodajte 5 ml radne otopine biuretskog reagensa i pomiješajte, izbjegavajući formiranje pjene. Nakon 30 minuta (i najkasnije u trajanju od sat vremena) mjeri se na fotometru u kiveti s debljinom sloja od 1 cm na valnoj duljini od 500-560 nm (zeleni svjetlosni filter) na praznom uzorku.

Prazno ispitivanje: dodati 0,1 ml 154 mmol / 1 otopine natrijevog klorida u 5 ml aktivnog biuretnog reagensa, zatim ga tretirati kao ispitni uzorak.

Izračun se provodi prema rasporedu umjeravanja.

Izrada grafikona umjeravanja: radna otopina se dobiva iz otopine umjeravanja kako je dolje navedeno.

Metode za određivanje ukupnog proteina u serumu

Proteini seruma su heterogena skupina proteina, uključujući transportne proteine, enzime, imunoglobuline, hormone, proteine ​​inhibitora i mnoge druge. Unatoč razlikama u sastavu, strukturi, fizičkim i kemijskim svojstvima i funkciji, serumski proteini imaju niz zajedničkih karakteristika:

  1. sadrže atome ugljika, vodika, kisika, dušika;
  2. sastoje se od aminokiselina povezanih peptidnim vezama;
  3. Apsorpcija u ultraljubičastom području spektra;
  4. ponašaju se slično u brojnim kemijskim reakcijama.

Polazeći od ovih općih svojstava, razvijene su metode za određivanje proteina u biološkim tekućinama.

Metode određivanja ukupnog proteina

Među metodama određivanja koncentracije ukupnog proteina može se razlikovati nekoliko glavnih skupina na temelju različitih načela:

  • azotometricheskie;
  • gravimetrijska (težina);
  • "Pretsipitatsionnye";
  • spektrofotometrija;
  • Refraktometrijska;
  • Kolorimctrijski.

Pored gore navedenih, razvijene su i druge metode, na primjer, fluorometrijske, polarimetrijske, kao i metode atomske apsorpcijske spektrofotometrije i analiza amino kiselina proteina.

Azotometrijske metode

Metode za određivanje serumske Azotometricheskie ukupni protein se temelji na određivanju količine dušika proteina, što rezultira uništenjem aminokiselina koje čine proteina. Metoda je prvi put predložila Kjeldahl 1883. U Kjeldahl postupku, sada predstavlja cijeli povijesni interesa, dušik koji se nalazi u sastavu proteina oksidirano amonijev ion, a njegova točna količina određuje titracijom sa solnom kiselinom. Nadalje, amonijev ion može se odrediti Nessler reagensa, manometarskoj postupkom nakon pretvorbe amonijev ion u molekularni dušik djelovanjem hipobromitom ili pomoću optičkog testa Vvarburg strane enzima dehidrogenaze glutamata. Temelji se na činjenici da se proteini iz bioloških objekata sadrži prosječno 16% dušika, dobiveni analizom dušika pomnožen s faktorom 6,25. Povijesno gledano, koristi se faktor 6.25, iako njegova vrijednost ovisi o sastavu proteina ispitnog uzorka. Za pojedine proteinske frakcije u serumu ili plazmi, faktorska vrijednost kreće se od 5,69 do 6,52.

Nedostatak metoda mjerenja dušika je trajanje i složenost postupka, iako se amonijak formiran u reakciji može odrediti enzimskom metodom. Automatizacija omogućuje upotrebu ove metode u brojnim slučajevima kao usporedbenu metodu zbog svoje dostatne točnosti i ponovljivosti.

Gravimetrijske metode

Gravimetrijske (težine) metode za određivanje ukupnog proteina sirutke temelje se na sušenju proteina na konstantnu težinu i vaganje na analitičkoj vagi. Metode su naporno i sada se praktički ne koriste za određivanje ukupnog proteina sirutke. Gravimetrijska metoda se nastavlja koristiti u nekim laboratorijima kako bi se odredio fibrinogen u krvnoj plazmi.

Metode "taloženja"

„Pretsipitatsionnye” Metode za određivanje ukupnih proteina temelje se na smanjenje topljivosti proteina i formiranje suspenzije čestica materijala pod utjecajem različitih sredstava. Na sadržaj proteina u uzorku za ispitivanje se ocjenjuje bilo je intenzitet raspršivanja svjetla (nephelometric metoda analize), određen je broj čestice koje raspršuju svjetlost, ili za ublažavanje svjetlosnog toka suspenzije Dobivena (turbodimetrijskom metoda za ispitivanje).

Rezultati ove skupine metoda ovise o različitim čimbenicima: brzini miješanja reagensa, temperature reakcijske smjese, pH medija, prisutnosti stranih spojeva, metoda fotometrije. Pažljivo pridržavanje reakcijskih uvjeta potiče stvaranje stabilne suspenzije s konstantnom veličinom suspendiranih čestica i proizvodnjom reproducibilnih rezultata. Metode "precipitacije" za određivanje proteina u serumu nisu prepoznate i pronađene su u određivanju proteina u mokraći, cerebrospinalnoj tekućini i mnogim pojedinačnim proteinima pomoću specifičnih protutijela.

Spektrofotometrijske metode

Spektrofotometrijske metode za određivanje ukupnog proteina krvnog seruma temelje se na mjerenju apsorpcije svjetlosti u ultraljubičastom području.

Proteinske otopine imaju apsorpciju na 270-290 i 200-225 nm. Apsorpcija na 270-290 nm određena je prisutnošću u proteinskoj molekuli aromatskih aminokiselina - tirozin, triptofan i fenilalanin. Apsorpcija na 200-225 nm gotovo je 20 puta veća od 280 nm, a uglavnom zbog peptidnih veza.

Točnost i specifičnost metoda određivanja bjelančevina na temelju apsorpcije na 270-290 nm je mala jer sadržaj tirozina i triptofana može varirati u različitim proteinima krvnog seruma. Osim toga, prisutnost određene pogreške u prisutnosti seruma slobodnih aminokiselina - tirozina i triptofana, mokraćne kiseline i bilirubina, apsorbirajući na 280 nm. U tom pogledu, ova metoda se ne koristi za izravno određivanje ukupnog sadržaja proteina u serumu.

Naprotiv, apsorpcija u ultraljubičastom području - 200 - 225 nm uzrokovana je ponajprije peptidnim vezama, pa se apsorpcija raznih proteina u serumu razlikuje beznačajno. U ovom spektralnom rasponu, zakon o pivnici se promatra kod koncentracije proteina u serumu do 120 g / l.

Određivanje ukupnog serumskog proteina direktnom fotometrijom na 210 nm daje rezultate usporedive s metodom biureta i Kjeldahl metodom. Istovremeno, ova metoda se praktički ne koristi zbog potrebe korištenja kvasaca koje ne apsorbiraju na 210 nm i monokromatora, što povećava trošak metode.

Refraktometrijske metode

Refraktometrijske metode za određivanje ukupnog proteina sirutke zasnovane su na sposobnosti proteinske otopine da odbace svjetlosni tok. Na temperaturi od 17,5 ° C, indeks loma vode 1,3332 na istoj temperaturi, indeks refrakcije seruma varira između 1,3480-1,3505. S obzirom na činjenicu da je koncentracija elektrolita i ne-proteinskih organskih spojeva koji utječu na njegovu snagu loma je niska, a dostatno stalna na zdravim humanog seruma, vrijednost indeksa loma serumu ovisi prvenstveno o njegovom sadržaju proteina. Kalibrirajte instrument s serumom poznate koncentracije proteina. Jednostavnost daje Refraktometrija prikladan postupak za određivanje ukupnog sadržaja proteina u serumu, iako se u velikom broju bolesti, posebno dijabetesa, kronične insuficijencije bubrega, njegova uporaba može dovesti do značajnih pogrešaka.

Kolorimetrijske (fotometrijske) metode

Kolorimetrijske metode za određivanje ukupnog proteina temelje se na boji reakcija proteina s reagensima koji stvaraju kromogene ili na nespecifično vezanje boje.

Među kolorimetrijskim metodama za određivanje ukupne koncentracije proteina seruma se najčešće smatra biuretnim testom na temelju takozvanog „biuretnim obojene reakcija”, u kojem se proteini reagira u alkalnom mediju s bakrenim sulfatom, čime se dobiju spojevi obojene u ljubičaste boje, intenzitet boje ovisi o koncentraciji ukupno proteina u serumu. Metoda biureta za određivanje ukupnog proteina u serumu odobrena je kao jedinstvena 1972. godine.

Kolorimetrijske metode za određivanje ukupnog proteina krvnog seruma su prilično jednostavne i relativno jeftine. Nedostatak metode je miješanje pojedinih tvari (uključujući lijekove).

Druge metode za određivanje ukupnog serumskog proteina

Fluorometrijske i drugih modernih metoda za određivanje ukupnih proteina (npr polyarigrafichesky Mikrometoda ili atomske apsorpcije analiza) pokazuju visoku osjetljivost i specifičnost, međutim, potrebno je unijeti posebnu opremu, a ponekad i posebnu kvalifikaciju analitičar uz određivanje dovoljno visoke vrijednosti čini ovo istraživanje metoda domene ustanove i značajno ograničava njegovo korištenje u kliničkom laboratoriju.

reference:

  • Priručnik "Laboratorijske metode istraživanja u klinici", uredio Menshikov VV - Moskva, "Medicina", 1987.
  • AV Kozlov A. V., Slepysheva V. V. - Određivanje proteina u krvnom serumu.
  • Medicinska biokemija: Laboratorijska radionica Urednik Semikolenova NA - Omsk, Izdavačka kuća državnog sveučilišta Omsk, 2005.

Vezani članci

Kvantitativne metode za određivanje ukupnog proteina u mokraći

Za kvantitativno određivanje proteina prikladan je svaki uzorak urina. Većina istraživača kako bi odredila veličinu dnevnog gubitka proteina preferira odrediti sadržaj proteina u mokraći prikupljenih dnevno.

odjeljak: urina

Ukupni serumski protein

Pojam ukupnog proteina krvnog seruma podrazumijeva veliki broj proteina prisutnih u krvnom serumu i razlikuje se po strukturi, fizikalno-kemijskim svojstvima, funkcijama. Svi proteini krvnog seruma podijeljeni su u albumin i globulin. U krvnoj plazmi uz albumin i globulin također sadrži fibrinogen, pa je ukupni sadržaj proteina u krvnoj plazmi neznatno veći nego u serumu.

odjeljak: Klinička biokemija

Određivanje ukupnog proteina u serumu prema reakciji biureta

Određivanje ukupnog proteina reakcijom biureta je daleko najčešća metoda određivanja ukupnog proteina u serumu. Metoda je relativno jeftina, jednostavna, ima dobru reproducibilnost i specifičnost, njegova upotreba omogućava istraživanje na analizatorima (automatski i poluautomatski) i na konvencionalnom fotometru.

odjeljak: Klinička biokemija

Protein u mokraći: metode za određivanje

Patološka proteinuria je jedan od najvažnijih i najčešćih znakova bolesti bubrega i mokraćnog sustava. Određivanje koncentracije proteina u mokraći je obvezan i važan element testa urina.

odjeljak: urina

Fotometrijske metode za određivanje uree

Fotometrijske metode za određivanje uree temelje se na reakciji uree s različitim tvarima s formiranjem spojeva u boji. Među fotometrijskim metodama za određivanje uree, najčešći se postupci temelje na reakciji ureje s diacetilnim monooksima.

odjeljak: Klinička biokemija

Predavanje: ODREĐIVANJE OPĆE PROTEINA U SERUMU

Rezultati pokusa Tablica 3.

SADRŽAJ IZVJEŠĆAPITANJA ZA SAMO POVRATAK

6.1. Koje razine strukturne organizacije proteinske molekule znate? Koje su veze uključene u stabilizaciju?

6.2. Što je denaturacija proteina? Koje su razine strukturalne organizacije uništene?

6.3. Koje su vam denaturirane tvari poznate? Koje veze u proteinskoj molekuli primarno uništavaju?

6.4. Što određuje topljivost proteina? Koji faktori stabiliziraju protein u otopini?

6.5. Što se podrazumijeva reverzibilnim i nepovratnim taloženjem proteina? Koje reakcije oborina proteina su reverzibilne? Koje su reakcije oborina proteina nepovratne?

6.6. Što uzrokuje nepovratne reakcije oborina proteina? Njihova primjena u medicinskoj praksi.

6.7. Hoće li protein koagulirati iz otopine u prisutnosti suvišne kiseline ili alkalija? Zašto?

6.8. Hoće li se protein precipitira pod djelovanjem: 1) male koncentracije otopine natrijevog klorida; 2) visoke koncentracije otopine natrijevog klorida; 3) niske koncentracije otopine živinog klorida?

6.9. Što je soliranje iz bjelančevina? Koja je svrha soljenja u medicini?

6.10. Što određuje naboj proteinske molekule u otopini?

6.11. Odredite izoelektričnu točku proteina. Kako mogu pronaći protein IET?

6.12. Odredite smjer kretanja proteina s pI = 4.6 kada se frakcionira elektroforezom u puferskoj otopini s pH = 8.2.

ODREĐIVANJE OPĆENITO PROTEINA U KRVNOM SERUMU

SVRHA RADAPOSAOTEORIJSKI DIO

Sadržaj ukupnog proteina u krvnom serumu (plazmi) može se karakterizirati konceptima normo-, hipo- i hyperproteinemije, kojim se podrazumijevaju stanja koja su popraćena normalnim (ne prelaze granice fiziološke fluktuacije), smanjene ili povećane koncentracije. Normalan sadržaj ukupnog proteina u krvnom serumu je: kod odraslih - 65-85 g / l u novorođenčadi - 46-60 g / l u djece mlađe od 2 godine - 51-75 g / l, preko 2 godine - 60-85 g / l.

Promjene u razini ukupnog proteina mogu biti apsolutan, i rođak. Potonji se obično primjećuje s povećanjem (smanjenjem) volumena krvi. Tako, polyplasmia ( „voda” trovanja), obiluje infuzije otopine glukoze i drugim fiziološkim tekućinama, ANURIJOM, sekrecijom antidiuretskog hormona aldosterona i da zadržavanje promicanja vode u tijelu dovode do razvoja u odnosu hipoproteinemija; dehidratacija (dehidracije) zbog gubitka tekućine za vrijeme anacatharsis, rasipan proljev, kolera, dijabetes insipidus, znojenje (groznica), poliurija otkriti relativnu hyperproteinemia.

Uz veliku većinu bolesti unutarnjih organa, uz pomake u metabolizmu bjelančevina, hipoproteinemija, medvjedi obično sekundarni stečene prirode (primarni hipoproteinemija dolazi relativno rijetko, te je određena genetski defekt nastaje zbog gena koji kodiraju određene proteine ​​seruma, kao što je -. analbumineniya, agammaglobulinemia et al).

Apsolutna hipoproteinemija otkrivena je u patološkim uvjetima u kojima dolazi do smanjenja biosinteze, povećane katabolizma ili povećanog gubitka proteina. Najčešći razlozi za to su:

1. Nedovoljno dijetetski unos proteina, obično opažena s pothranjenosti, glad, tumora, suženja jednjaka, poremećaji funkcije gastrointestinalnog trakta (zbog razgradnje proteina probavu i apsorpciju prehrambenih sastojaka), kada produljenim upala u crijevima. Prema A.A. Pokrovsky, čak i neuravnotežen aminokiselinski sastav hrane može ponekad dovesti do hipoproteinemije.

2. Inhibicija funkcija jetre proteosinteticheskoy promatra u parenhima hepatitisa, kao i trovanje uzrokovano dugim gnojnim postupcima malignoma djelovanje nekih kemijskih otrova. Pogođene stanice jetre, koji su mjesto stvaranja albumin, fibrinogen i globulina dijela, u nemogućnosti da se sintetizira proteine ​​plazme u dovoljnim količinama, tako da je razvoj hipoproteinemija dospijeća uglavnom hipoalbuminemije i hypofibrinogenemia.

3. Povećanje razgradnje bjelančevina u tijelu uzrokovano potrebom za oporavkom velikih troškova energije povezanih s deficitom plastičnih resursa (spaljivanjem bolesti, malignih neoplazmi, hipertireoze, hiperkorticizma itd.).

4. Gubitak tjelesne proteina s krvlju za vrijeme akutne i kronične krvarenja u izlučivanju nefrotski sindrom, kroz oštećenu crijevne sluznice (malabsorption) i kože (psorijaza, opekline opsežne i slično).

Smanjeni sadržaj proteina u krvnoj plazmi se opaža čak i pod određenim fiziološkim uvjetima, na primjer kod žena u posljednjim mjesecima trudnoće i tijekom laktacije.

Treba napomenuti da, kako bi se osigurali normalni životni procesi, tijelo koristi hipoglikemijske proteine ​​prvenstveno za frakciju albumina proteinskih proteina. Uz povećanu konzumaciju albumina, koji uglavnom određuju onkotski tlak krvi, nastaju edemi, koji su zabilježeni u patološkim uvjetima, uz smanjenje sadržaja proteina u krvnoj plazmi ispod 50 g / l. Također je poznato da je polovica kalcija krvne plazme vezana za albumin. Prema tome, hipoalbuminemija gotovo je uvijek praćena hipokalcemijom. U ovom slučaju, jedini dio kalcija koji je povezan s proteinom (fiziološki neaktivan) se smanjuje, što ne dovodi do razvoja tetanusa i napadaja. Jedna od važnih funkcija albumina je vezanje i transport bilirubina, slobodnih masnih kiselina i mnogih lijekova (npr. Salicilati, penicilin i sulfonamidi). Lijekovi povezani s albuminom fiziološki i farmakološki nisu aktivni. Značajno smanjenje albumina u plazmi, što dovodi do smanjenja kapaciteta vezanja, može povećati razinu slobodnih frakcija gore navedenih tvari, što može rezultirati toksičnim učincima pri uobičajenim dozama lijekova.

Apsolutna hiperproteinemija - relativno rijedak fenomen. To je obično uzrokovano povećanjem biosinteze globulina u staničnim elementima fagocitnog mononuklearnog sustava (zbog njihove infektivne ili toksične iritacije) s produženim kroničnim upalnim procesima. To se posebno opaža kod kroničnog poliartritisa, ciroze jetre i nekih kroničnih procesa.

Značajna i trajna albuminosis - do 120 g / l, a gore određen je multipli mijelom (plazmacitoma), makroglobulinemije Valdenshtrema, što rezultira ravnim kosti lubanje postoje dodatni formiranje žarišta „abnormalnih” ili patološkim proteina - paraproteins. Dakle, ako je pacijent pokazala visok sadržaj ukupnih proteina u krvnoj plazmi, to bi trebao biti dodatno vrednovati za identifikaciju ovih oblika abnormalnih proteina.

Otkrivanje abnormalnih proteina u serumu (Paraproteinemia) najčešće vidi u patološkim uvjetima, na temelju nastanka od kojih su maligne neoplazme: mielomatoz, koji račune za većinu slučajeva malignog paraproteinemia; Limfomi B stanica, uključujući kroničnu limfocitnu leukemiju; bolesti povezane s poremećajima teškog lanca imunoglobulina, koji uključuju skupinu rijetko se javljaju bolesti karakteriziranih nakupljanjem u krvnoj plazmi i urinu abnormalnog proteina identificiran s fragmentom H lanca. Se odnosi na skupinu paraproteinemia i krioglobulinemija, u kojoj je u krvnoj plazmi pacijenata otkrila prisutnost cryoglobulins, koji uključuju proteine ​​je istaložio hlađenjem uzoraka u krvnoj plazmi ispod temperature ljudskog tijela. Ponekad, osobito ako je koncentracija proteina je visok, oborine intravaskularni može uzrokovati kožne promjene, kao što su purpura ili Raynaud-ovog fenomena.

Iz navedenog, hipoproteinemija je gotovo uvijek povezana s hipoalbuminemijom, i hiperprotekvinom s hiperglobulinemijom.

U mnogim bolestima, postotak pojedinih frakcija proteina često se mijenja, iako ukupna količina proteina u serumu ostaje unutar normalnih granica. Ovo se stanje zove dysproteinemia. Na primjer, zbog relativno niske molekulske mase, gubitak značajne količine albumina pojaviti u uvjetima koji su karakterizirani povećanom propusnošću biološke membrane odvajaju iz plazme krvi tekućini. Stoga, ako je upalna reakcija na ozljedu, zbog povećane krvožilne propustljivosti, postoji „znojenja” albumina u tekućini, što dovodi do smanjenja njegove koncentracije u plazmi - hipoalbuminemije. Međutim, plazma frakcija povećava se brzo globulin frakcije (prvenstveno-globulini, koji uključuju u svojim sastav proteina akutne faze reaktanata ili g-globulin), koji se obično ne mijenja ukupna koncentracija proteina u serumu. Istodobno, dolazi do oštrih promjena omjera različitih proteinskih frakcija krvne plazme.

REDOSLIJEDKvantitativno određivanje ukupnog proteina u krvnom serumu pomoću biuretske metode

Trenutačno poznate metode kvantitativnog određivanja proteina seruma u krvi mogu se podijeliti u kolorimetriju, bazirane na reakcijama u boji proteina s određenim reagensima; spektrofotometrijski, koji se sastoji u mjerenju stupnja apsorpcije svjetlosti u ultraljubičastom području i ostalih. Od kolorimetrijskih metoda, posebnu pozornost treba posvetiti metodama koje se temelje na reakciji biureta. Vrlo su točne, praktički dostupne i temelje se na sposobnosti proteina da reagiraju u alkalnom mediju s bakrenim sulfatom, stvarajući složene spojeve ljubičaste boje. Istodobno, razlike u intenzitetu obojenja kompleksa formiranih albuminima i globulinima su beznačajne, što omogućuje upotrebu ove metode za otkrivanje razine gotovo svih proteina u serumu.

Tijek rada

U 0,1 ml krvnog seruma se dodaje u 5 ml radne otopine biuretnog reagensa. Nakon 30 minuta na FEKe kolorimetriruyut uzorka u kiveti debljine sloja od 10 mm sa zelenim filterom (546 nm valne duljine) u odnosu na kontrolu, koja se dobiva dodavanjem u 5 ml biuretnim reagensa, radna otopina 0,1 ml 0,9% NaCl. Izračun se obavlja prema kalibracijskoj krivulji.

Izrada kalibracijske krivulje. Iz 10% standardne otopine proteina u 0,9% -tnoj otopini NaCl pripravljaju se standardne radne otopine kako je prikazano u tablici 10 (0,1 ml standardne otopine sadrži 0,01 g proteina). Od svakog razrjeđivanja uzmite 0,1 ml radne otopine i dodajte u epruvete s 5 ml biuretnog reagensa. Nakon 30-60 minuta mjeri se nestanak standardnih uzoraka na FEC-u protiv kontrole.

Prosječne vrijednosti optičke gustoće, koje odgovaraju različitim koncentracijama, primjenjuju se na milimetarski papir. Na apscisu se prikazuju koncentracije standardnih proteinskih otopina i odgovarajuće vrijednosti optičke gustoće na osi ordinata. Kroz dobivene bodove izvlači se ravna crta.

Podaci za izradu kalibracijske krivulje za kvantifikaciju koncentracije ukupnog proteina u krvnom serumu prikazani su u tablici 4.

Podaci za izradu grafikona umjeravanja Tablica 4